細胞培養操作規程

，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

公司細胞現貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。公司產品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環化酶9抗體

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

CM-M044小鼠結腸平滑肌細胞*培養基100mL對胺蘭250克2～8°C

DSC2 Others Rat 大鼠 DSC2 / Desmocollin-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-羥基 2-Hydroxy,99% 614-75-5 10G 通用試劑

角質細胞培養基KM-acf錄化鑭七水合物 LcNTHcNUM CHLORIDq HqPTcHYDRcTq 1002-84-0

HCE1細胞，細胞 小鼠紅白血病細胞,MEL細胞 人腦血管外膜成纖維細胞HBVSMCDEAE纖維素1毫升2～8℃

Hela S3(人細胞) 5×106cells/瓶×266-84-2葡萄糖胺鹽酸鹽GlucosaMine xy7nochloride
2BS細胞，胚肺細胞 人前列腺癌細胞,VLcop細胞 人腎小管上皮細胞;HKC羅漢果皂苷V(標準品)Mogroside Ⅴ質量規格：HPLC≥98%，標準品

獼猴皮膚細胞;MMS7絡塞維（標準品）Rosavin質量規格：HPLC≥98%，標準品

TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細胞裂解液 (陽性對照) 落新婦苷(標準品)Astilbin質量規格：HPLC≥98%，標準品

人小細胞肺癌;NCI-H2227馬錢苷（標準品）Loganin質量規格：HPLC≥98%，標準品

KIT Others Human 人 KIT / c-KIT / CD117 (aa 540-972) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 馬錢苷酸(標準品）Loganic acid質量規格：HPLC≥98%，標準品
豬肺泡巨噬細胞RL95-2人內膜癌細胞 Human endomeial carcinoma cells RL95-2 D-MEM/F-12培養基+10%FBS鹽酸普拉克索（標準品）質量規格：HPLC>98%,標準品Pramipexole 2HCL monohydrate

HGF Protein Mouse 重組小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 (His 標簽)硫酸長春堿質量規格：>97%,BRVinblastine Sulfate

小小神經膠質細胞(MM)(5×105) RBE, 人肝膽管癌細胞 Human異甘草素（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Isoliquiritigenin

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化)人參皂苷Re(標準品)質量規格：HPLC≥98%，標準品Ginsenoside Re

人主動脈平滑肌細胞 (HASMC)( 5×105 )人參皂苷F4,人參皂苷Rg4質量規格：HPLC≥98%，標準品Ginsenoside F4
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，